Пречиствателно оборудване за пречистване на олигонуклеотиди

1. Пречистване с гел електрофореза и хроматография
Използвайте денатурираща полиакриламидна гел електрофореза хроматография за пречистване.Денатуриращият агент обикновено е 4М формамид или 7М урея, концентрацията на акриламид е между 5-15%, а делът на метакриламид е главно между 2-10%.
След електрофореза позицията на лентата на нуклеиновата киселина трябва да се определи при облъчване с ултравиолетова светлина, гелът, съдържащ целевата нуклеинова киселина, се отрязва, нуклеиновата киселина се разбива и излугва и след това разтворът за излугване се концентрира, обезсолява, количествено определени и лиофилизирани.

2. DMT-On, HPLC пречистване
Изберете режим DMT-On по време на синтеза, суровият продукт се центрофугира и концентрира при стайна температура за отстраняване на излишния амоняк след аминолизата.
Разделянето се извършва при използване на колона C18 с ацетонитрил и 10% триетиламин-оцетна киселина (TEAA) като елуент.След като елуирането приключи, се концентрира и след това DMT групата се отстранява с трифлуорооцетна киселина.След неутрализация, някои соли и малки молекули се отстраняват през отрязана тръба и накрая се обезсоляват.

Този метод може да получи продукт с по-висока чистота, но е необходимо да се обърне внимание на появата на депуринация.

3. DMT-Off, HPLC пречистване
Изберете DMT-Off по време на синтеза и суровият продукт се центрофугира и концентрира при стайна температура за отстраняване на излишния амоняк след амонолиза.
Разделянето се извършва при използване на колона С18 с ацетонитрил и 10% триетиламин-оцетна киселина във вода като елуент.След като разделянето приключи и се определи количествено, аликвотните части се лиофилизират.

Този метод изисква внимателно регулиране на условията на разделяне и може също така да получи относително чисти целеви молекули.