В типичния синтез на ДНК, РНК и неестествени нуклеинови киселини, етапът на премахване на защитата и свързване играе решаваща роля.
Етапът на премахване на защитата е да се отстрани DMT групата на твърдата подложка или 5' хидроксилната група на предишния нуклеозид с органична киселина и да се изложи хидроксилната група за следващия етап на свързване.3% трихлороцетна киселина в дихлорометан или толуен се използва най-вече за извършване на етапа на премахване на защитата.Концентрацията на трихлороцетна киселина и времето за премахване на защитата (времето за деблокиране) доминират чистотата на крайните продукти.Ниската концентрация и недостатъчното време за деблокиране оставят нереагирала DMT група, което намалява добива и увеличава нежеланите примеси.Продължителното време за деблокиране може да доведе до депурин на синтезирани последователности, образувайки неочаквани примеси.
Стъпката на свързване е чувствителна към водното съдържание на разтворителите и влагата във въздуха.Концентрацията на вода в синтеза трябва да бъде по-малка от 40 ppm, по-добре по-малко от 25 ppm.За да се запази състоянието на безводен синтез, синтезът на нуклеиновите киселини трябва да се извършва в среда с ниска влажност, затова препоръчваме на нашите клиенти да използватОборудване за разтворени амидити, който може да разтвори прахообразния или маслен фосфорамидит в безводен ацетонитрил, за да избегне контакт с въздуха.
Тъй като разтварянето на фосфорамидитите е по-добро в ситуация без вода и молекулярните капани за адсорбиране на следите от вода в реагентите и амидита, трябва да се подготвиМолекулярни капани.Препоръчваме 2 g подсито за 50-250 ml бутилки с реагент, 5 g за 250-500 ml бутилки с реагент, 10 g за 500-1000 ml бутилки с реагент и 20 g за 1000-2000 ml бутилки с реагент.
Разтварянето на фосфорамидитите трябва да се извършва в инертна атмосфера и замяната на активиращите реагенти и ацетонитрил трябва да приключи навреме.Реагентите за затваряне и окисляване трябва да се използват възможно най-скоро, отворените реагенти дават по-малък срок на годност и по-малко активност по време на синтеза.
Време на публикуване: 09 август 2022 г