Основният принцип на синтеза на ДНК

Химическият синтез на ДНК се основава на стратегията за синтез на твърда фаза и фосфорамидитната химия.За разлика от биологичния синтез на ДНК, материалът в химическия синтез на ДНК е DMT (4, 4-диметокситритил) и фосфорамидитно модифициран дезоксирибоксисид, както е показано на фигура 1. Синтезът на ДНК се извършва върху твърда подложка (ние можем да предложим различни отОлиго синтезна колона), т.е. CPG (стъкло с контролирани пори) и PS (полистирен), и целият синтез се извършва наДНК/РНК синтезатор, което е нашето основно оборудване, има различен модел като: HY едноканален синтезатор, HY-12, HY-192 и т.н., посоката на синтез е от 3' до 5', а нуклеотидът се въвежда в твърдата опора чрез един цикъл на синтез.Типичният цикъл на синтез съдържа четири стъпки, премахване на защитата, свързване, затваряне и окисляване (Фигура 2).Отстраняването на защитата е настроено да отстрани DMT групата на твърдата подложка или 5' хидроксилната група на предишния нуклеозид, 3% трихлороцетна киселина в дихлорометан се използва като реагент за премахване на защитата.След това модифицираният с фосфорамидит дезоксирибоксизид се оставя да разкрие хидроксилната група с помощта на активатор, т.е. 5-етилтиотетразол или 4,5-дицианоимидазол, образувайки фосфитетриестер (III), и се осъществява етапът на свързване.Провежда се етап на затваряне, за да се блокира нереагиралата хидроксилна група по време на етапа на свързване, за да се сведе до минимум образуването на нежелани дефектни последователности.Накрая, нестабилният фосфитетриестер (III) се окислява до химически стабилен фосфортриестер (V) с йод като окислител в присъствието на пиридин.

Синтезираната ДНК може да бъде разцепена от твърдата подложка чрез аминолиза, 2-цианоетил защитената група на фосфортриестера и амидът на нуклеобазата се разцепват едновременно, Синтезните плочи и Синтезните колони в стелажи се поставят директно в реакционната камера отОборудване за премахване на защитата.Суровата ДНК може да бъде приготвена чрез HPLC, електрофореза и OPC при поискване, ние също можем да ви предоставимПречиствателно оборудванеза последваща обработка.